農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞 表達分析
簡要描述：
農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞 表達分析 EHA105菌株由EHA101菌株改造而來，染色體背景為C58，核基因含篩選標簽—利fu平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105（pTiBo542DT-DNA），此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能雖被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-D
產(chǎn)品時間：2024-06-26
打印當前頁EHA105(pSoup-p19) Chemically Competent Cell
農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞
產(chǎn)品標簽：
EHA105菌株；農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞；Rifampicin（Rif） 利fu平；Kanamycin（kan）卡那mei素；EHA101；LBA4404；GV3101；AGL1；植物轉(zhuǎn)基因研究；
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2475-1000UL | EHA105(pSoup-p19) Chemically Competent Cell | 10×100μl | 288 |
MF2475-5000UL | EHA105(pSoup-p19) Chemically Competent Cell | 50×100μl | 1228 |
產(chǎn)品描述：
EHA105菌株由EHA101菌株改造而來，染色體背景為C58，核基因含篩選標簽—利fu平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105（pTiBo542DT-DNA），此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA105（pTiBo542DT-DNA）質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能雖被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移）。在EHA105菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒：pSoup-p19，即得到：EHA105 (pSoup-p19)菌株，可幫助pGreen，62SK，pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復制，同時賦予該菌株四環(huán)素（tetR）抗性，適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。
我司（懋康生物）提供的EHA105 (pSoup-p19)化學轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，基因型為C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT- DNA) Succinamopine (pSoup-p19-tetR)，經(jīng)pGs2質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2475-1000UL | MF2475-5000UL | ||
MF2475-A | EHA105(pSoup-p19)Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2475-B | pGs2 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
保存與運輸條件：
保存：-80℃保存，1年有效。
運輸：干冰運輸。
注意事項
1） 感受態(tài)細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2） 整個轉(zhuǎn)化操作，嚴格根據(jù)相應溫度及無菌條件要求進行。
3） 加入質(zhì)粒的體積不應大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，會導致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
4） 為確保轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫。
5） 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少最終涂板用量。
6） 平板上克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，克隆生長變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應減少質(zhì)粒用量。
7） 培養(yǎng)基中加入利fu平的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入鏈mei素或慶大mei素可防止Ti質(zhì)粒丟失，但鏈mei素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作，一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮鏈mei素或慶大mei素，因Ti質(zhì)粒丟失的概率極低（基本可以忽略）
8） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 取-80℃保存的感受態(tài)細胞于室溫或手心片刻待其部分融化，達到冰水混合狀態(tài)時插入冰浴中使其完quan融化。
2) 往100μl感受態(tài)細胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于10μl）質(zhì)粒DNA，用手撥da管底使其混勻，依次于冰上靜置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。
【注意】：次使用，建議做預實驗確定所加質(zhì)粒的用量。
3) 加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2-3h。
4) 6,000rpm離心1min，吸掉600ul上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應抗生素的LB或YEB平板上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養(yǎng)2-3天。
【注意】：當平板只含50μg/ml卡那mei素時，28℃培養(yǎng)48h即可；當平板中同時加入50μg/ml卡那mei素和10μg/ml利fu平時，需28℃培養(yǎng)48-60h；當平板中同時加入50μg/ml卡那mei素和20μg/ml利fu平時，需28℃培養(yǎng)60-72h；不建議使用超過20μg/ml的利fu平用于平板或液體培養(yǎng)。
5）目的克隆的液體培養(yǎng)：
j小量搖菌：往15ml的圓底透氣試管中加入1ml含對應抗生素的LB液體培養(yǎng)基，從新鮮培養(yǎng)的平板上挑1-2個單菌落接種，30℃，200rpm搖菌24-48h。
k大量搖菌：100ml透氣三角瓶內(nèi)加入少于20ml含對應抗生素的LB液體培養(yǎng)基，取小搖菌液按2%比例接菌，30℃，200rpm搖菌24-48h。
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附表1固體和液體LB培養(yǎng)基配方
組分Component | LB（液體）/升 | LB（固體）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化鈉NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表2固體和液體YEB培養(yǎng)基配方
組分Component | YEB（液體）/升 | YEB（固體）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物Yeast extract | 1g | 1g |
牛肉浸膏Beef Extract | 5g | 5g |
蔗糖Sucrose | 5g | 5g |
七水硫suan鎂MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表3常見農(nóng)桿菌對抗生素敏感性總表
農(nóng)桿菌菌株 | 羧芐（carb） | 鏈mei素（strep） | 利fu平（rif） | 慶大mei素（gent） | 卡那mei素（kan） |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
AGL1 | R | S | R | S | S |
【備注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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