JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 細(xì)胞凋亡
簡要描述:
JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 細(xì)胞凋亡:JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit)是一種以JC-10為熒光探針,快速且靈敏的檢測細(xì)胞、組織或純化線粒體膜電位變化的試劑盒。因線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件
產(chǎn)品時(shí)間:2019-06-24
JC-10 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit
JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒
溫馨提示:見我司整理線粒體熒光探針產(chǎn)品專題。
產(chǎn)品標(biāo)簽
Rhodamine 123 羅丹明123;JC-1;JC-10;CCCP;CAS:62669-70-9
訂購信息:
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
JC-10 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 | MX3207-100T | 100T | 1800 |
產(chǎn)品描述
JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit)是一種以JC-10為熒光探針,快速且靈敏的檢測細(xì)胞、組織或純化線粒體膜電位變化的試劑盒。因線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。因此本試劑盒可用于早期的細(xì)胞凋亡檢測。
JC-10是一種新型的用來監(jiān)測線粒體膜電位變化的熒光探針,是JC-1的*替代物。與JC-1相比,具有以下幾個(gè)重要優(yōu)勢:1)溶解性得以改良——在水溶液中形成沉淀可能性明顯降低;2)使用更方便——簡化步驟將手動(dòng)操作時(shí)間zui小化;3)熒光信號(hào)更高——改良的信號(hào)與背景熒光的信噪比;4)結(jié)果更穩(wěn)定——優(yōu)化探針以保證更連續(xù)性和穩(wěn)定性結(jié)果。
JC-10是一種替換JC-1,用于檢測線粒體膜電位△Ψm的理想熒光探針。JC-10以電勢依賴性的方式積聚在線粒體內(nèi),可以用來檢測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常線粒體內(nèi),JC-10聚集在線粒體基質(zhì)中形成聚合物,聚合物發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光(Ex=540 nm, Em=590 nm);不健康的線粒體由于膜電位的下降或喪失,JC-10只能以單體的形式存在于胞漿中,產(chǎn)生綠色熒光(Ex=490 nm, Em=525 nm)。JC-10不僅可用于定性檢測,因顏色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測,因線粒體的去極化程度可以通過紅/綠熒光強(qiáng)度的比例來衡量。
本試劑盒提供CCCP用作線粒體膜電位喪失的陽性對(duì)照。對(duì)于六孔板樣品,本試劑盒可檢測100個(gè)樣品。
產(chǎn)品包裝
編號(hào) | 組分名稱 | 規(guī)格 | 保存方法 |
MX3207-A | JC-10(200×) | 5×100μl | -20℃避光,避免反復(fù)凍融 |
MX3207-B | JC-10染色緩沖液(5×) | 80ml | -20℃或4℃ |
MX3207-C | 超純水 | 90ml | -20℃或4℃ |
MX3207-D | CCCP(10mM) | 20μl | -20℃ |
注意事項(xiàng)
1) JC-10(200×)在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以20~25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
2) 裝載完JC-10后用JC-10染色緩沖液(1×)洗滌時(shí),使JC-10染色緩沖液(1×)保持4℃左右,此時(shí)洗滌效果較好。
3) JC-10探針裝載完并洗滌后盡量在30min內(nèi)完成后續(xù)檢測。在檢測前需冰浴保存。
4) 請(qǐng)勿把JC-10染色緩沖液(5×)全部配制成JC-10染色緩沖液(1×),本試劑盒使用過程中需直接使用JC-10染色緩沖液(5×)。
5) 如果發(fā)現(xiàn)JC-10染色緩沖液(5×)中有沉淀,必須全部溶解后才能使用,可在37℃加熱促進(jìn)溶解。
6) CCCP為線粒體電子傳遞鏈抑制劑,有毒,請(qǐng)注意小心防護(hù)。
7) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. JC-10染色工作液制備
對(duì)于六孔板,每孔所需 JC-10 染色工作液的量為1ml,其他培養(yǎng)器皿的JC-10 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100萬細(xì)胞需0.5mL JC-10染色工作液。
2. 陽性對(duì)照的設(shè)置
CCCP(10mM)推薦按1∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10μM,處理細(xì)胞20min。隨后按照下述方法裝載JC-1,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。
對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10μM CCCP處理20 min后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-10 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-10 染色后應(yīng)顯示綠橙色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3. 對(duì)于懸浮細(xì)胞
1) 取10~60萬細(xì)胞,重懸于0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2) 加入0.5mL JC-10 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃孵育20min。
3) 孵育期間,按照每1mL JC-10 染色緩沖液(5×)加入4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-10 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
4) 37℃孵育結(jié)束后,600×g4℃離心3~4min沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5) 用JC-10 染色緩沖液(1×)洗滌2 次:加入1mL JC-10 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600×g4℃離心3~4min沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入1mL JC-10 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600×g4℃離心3~4min沉淀細(xì)胞,棄上清。
6) 再用適量JC-10 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
4. 對(duì)于貼壁細(xì)胞
【注意】:對(duì)于貼壁細(xì)胞,如果希望采用熒光分光光度計(jì)或流式細(xì)胞儀檢測,可以先收集細(xì)胞,重懸后參考懸浮細(xì)胞的方法進(jìn)行檢測。
1) 對(duì)于六孔板的一個(gè)孔,吸除培養(yǎng)液,根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)如有必要可用PBS 或其它適當(dāng)
5. 對(duì)于純化的線粒體
1) 將配制好的JC-10 染色工作液再用JC-10 染色緩沖液(1×)稀釋5 倍。
2) 0.9mL 5 倍稀釋的JC-10 染色工作液中加入0.1mL 總蛋白量為10~100μg 純化的線粒體。
6. 熒光觀測和結(jié)果分析
檢測 JC-10 單體時(shí)可以把激發(fā)光設(shè)置為490nm,發(fā)射光設(shè)置為525nm;檢測JC-10聚合物時(shí),可以把激發(fā)光設(shè)置為540nm,發(fā)射光設(shè)置為595nm。
【注1】:此處測定熒光時(shí)不必把激發(fā)光和發(fā)射光設(shè)置在大激發(fā)波長和大發(fā)射波長。如使用熒光顯微鏡觀察,檢測JC-10聚合物時(shí)可使用常來檢測TRITC用的標(biāo)準(zhǔn)帶通濾波器。檢測JC-10單體可使用常來檢測FITC或GFP的標(biāo)準(zhǔn)帶通濾波器。出現(xiàn)綠色熒光說明線粒體膜電位下降,并且該細(xì)胞很可能處于細(xì)胞凋亡早期。出現(xiàn)綠橙色熒光說明線粒體膜電位比較正常,細(xì)胞的狀態(tài)也比較正常。
【注2】:由于紅色的JC-10信號(hào)淬滅比綠色快,所以用標(biāo)準(zhǔn)帶通濾波器檢測時(shí)先檢測紅色熒光。
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 細(xì)胞凋亡
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