Fluo-3, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針，超級純（95%）

【務(wù)必注意】：初次使用離子探針的用戶，強(qiáng)烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細(xì)胞培養(yǎng)級（MS4301-1G）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內(nèi)加載性。

搜索關(guān)鍵詞：

Fluo-3 AM；Fluo-4, AM；Rhod-2 AM；Rhod-4 AM；Fura-2 AM；可見光激發(fā)波長Ca2+熒光探針；CAS：121714-22-5；

產(chǎn)品信息：

基本介紹：

Fluo-3是一種常用的可見光激發(fā)波長Ca2+熒光探針，具有較高的Ca2+捕獲能力，通過熒光強(qiáng)度的變化直接反映Ca2+信號的動力學(xué)變化。當(dāng)Fluo-3以游離配體形式存在時幾乎是非熒光性的，但一旦與Ca2+結(jié)合即可產(chǎn)生很強(qiáng)的熒光，熒光信號增強(qiáng)60~80倍，此時的大激發(fā)波長為506nm，大發(fā)射波長為526nm?？赏ㄟ^激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀等來檢測胞內(nèi)鈣離子水平的變化。

Fluo-3, AM是Fluo-3的一種乙酰甲酯衍生物，具有細(xì)胞膜滲透性，只需簡單培養(yǎng)，即可輕易進(jìn)入細(xì)胞。一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，即被其內(nèi)酯酶剪切生成不具膜滲透性的Fluo-3，從而滯留在胞內(nèi)以發(fā)揮相應(yīng)生理功能。本品以凍干粉的形式提供，使用時只需經(jīng)無水DMSO充分溶解，配置成2~5mM的儲存液，并依據(jù)具體實驗和相關(guān)文獻(xiàn)資料調(diào)整到需要的工作濃度即可。

產(chǎn)品特性

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項

1）  熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）  乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后請在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3）  Fluo-3, AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可在20-25℃溫育片刻至全部融解后使用。

4）  基于BAPTA結(jié)構(gòu)的鈣離子指示劑比如Fluo-3，F(xiàn)luo-4，能夠結(jié)合很多重金屬陽離子（比如：Mn2+、Zn2+、Pb2+）且實質(zhì)上親和力高于Ca2+。因此，由于這些重金屬離子存在對鈣測定的干擾可使用重金屬螯合劑-TPEN（MX4529-25MG）來控制。

5）  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法（針對人T細(xì)胞Ca2+濃度檢測）

A，  試劑準(zhǔn)備

1）  配制Pluronic F-127母液

100mgPluronic F-127粉末（貨號：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存，不用冷藏。如有結(jié)晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。

2）Hanks Balanced Salt Solution（HBSS），w/o Ca2+，Mg2+

3）HEPES Buffer Saline

配方：10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4

B，  操作步驟

1）  用無水DMSO溶解Fluo-3, AM配制成2-5mM的儲存液，或?qū)⒁雅浜玫腇luo-3, AM儲存液取出于室溫回溫。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fluo-3,AM中加入11µl無水DMSO）。

2）  向Fluo-3, AM+DMSO溶液中加入等體積的20% Pluronic F-127溶液，Pluronic F-127可以防止Fluo-3, AM在HBSS中聚合并促使探針更好進(jìn)入細(xì)胞?！咀ⅰ浚篜luronic F-127可降低Fluo-3, AM的穩(wěn)定性，因此只建議在配制工作液時加入，不建議將其加入儲存液長期保存。

3）  用HBSS稀釋Fluo-3, AM溶液，制備2-5µM的Fluo-3, AM工作液?！咀ⅰ浚和扑]該探針加載濃度在4-5µM，具體的使用濃度需根據(jù)實驗要求進(jìn)行優(yōu)化。為了避免過度加載造成細(xì)胞毒性，建議在取得有效結(jié)果的基礎(chǔ)上盡量使用zui低濃度探針。

4）  將Fluo-3, AM工作液加入細(xì)胞，加入量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。37℃孵育20min。

5）  加入5倍體積的含有1% FBS的HBSS，繼續(xù)孵育40min。

6）  用HEPES Buffer Saline洗滌細(xì)胞3次，然后用HEPES Buffer Saline使細(xì)胞重懸，制成1×105cells/ml的溶液。

7）  37℃孵育10min，之后用流式細(xì)胞儀或者共聚焦顯微鏡進(jìn)行熒光鈣離子檢測。大激發(fā)波長506nm，大發(fā)射波長526nm。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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