X-Gal
簡要描述：
X-Gal利用α-半乳糖苷酶水解二糖-蜜二糖作為碳源，酵母菌得以正常生長或進行發(fā)酵。釀酒酵母菌內(nèi)，該酶由幾種GAL基因調(diào)控的MEL1基因所編碼。
產(chǎn)品時間：2024-03-21
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X-Gal（α-半乳糖苷酶顯色底物/酵母雙雜交檢測）
— 酵母雙雜交檢測系統(tǒng)/蛋白-蛋白相互作用分析
搜索關(guān)鍵詞：X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷；α-半乳糖苷酶 a-galactosidase；MEL1基因；GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)；藍白斑篩選；CAS：107021-38-5；
X-α-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷，CAS：107021-38-5），一種用來檢測α-半乳糖苷酶（也稱為蜜二糖酶，α-D-半乳糖苷半乳糖水解酶，EC 3.2.1.22）活性的顯色底物。X-α-Gal的使用，避開雙雜交分析中β-半乳糖苷酶溶液制備和濾膜提升實驗（filter-lift assay）的繁瑣操作，只需直接添加在培養(yǎng)基上，通過藍色沉淀的生成與否，即可用來檢測雙雜
X-Gal簡介：
X-α-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷，CAS：107021-38-5），一種用來檢測α-半乳糖苷酶（也稱為蜜二糖酶，α-D-半乳糖苷半乳糖水解酶，EC 3.2.1.22）活性的顯色底物。X-α-Gal的使用，避開雙雜交分析中β-半乳糖苷酶溶液制備和濾膜提升實驗（filter-lift assay）的繁瑣操作，只需直接添加在培養(yǎng)基上，通過藍色沉淀的生成與否，即可用來檢測雙雜交相互作用。X-α-Gal可用來區(qū)分腸桿菌科內(nèi)的不同物種以及劃分乳酸菌和雙歧桿菌。組織學(xué)研究中，X-α-Gal還可借助光學(xué)顯微鏡來檢測組織的α-半乳糖苷酶活性。
一旦GAL4激活，α-半乳糖苷酶分泌，之后水解培養(yǎng)基上的X-α-Gal，使得菌落產(chǎn)生藍斑。酵母雙雜交研究用的工程菌包括AH109，PJ69-2A，Y190和Y187。
優(yōu)勢：
避開雙雜交分析中β-半乳糖苷酶溶液制備和濾膜提升實驗（filter-lift assay）的繁瑣操作，只需直接添加在培養(yǎng)基上，通過藍色沉淀的生成與否，即可用來檢測雙雜交相互作用。
與酵母雙雜交系統(tǒng)：
酵母雙雜交篩選是體內(nèi)用來檢測蛋白-蛋白相互作用的一種遺傳分析實驗，此方法由Prof. Stan Fields及合作者開發(fā)用來調(diào)查兩個已知蛋白的相互作用，另一個重要應(yīng)用是從文庫內(nèi)篩選并鑒定某一特定蛋白的未知結(jié)合蛋白。陽性克隆也就是那些能夠激活報告基因轉(zhuǎn)錄子，使得營養(yǎng)缺陷型酵母雙雜交菌株在營養(yǎng)缺陷選擇性培養(yǎng)基上生長的菌落。大多數(shù)雙雜交方法使用大腸桿菌的LacZ基因作為第二個報告基因，通常要使用非常耗時的filter-lift assay來鑒定能在第二種選擇性平板上生長的菌落。而替換使用的X-α-Gal，可直接在營養(yǎng)缺陷性的選擇培養(yǎng)基上來檢測基于GAL4-轉(zhuǎn)錄子的雙雜交作用。
基本特性：
CAS 07021-38-5
化學(xué)名：5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-α-D-galactopyranoside 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷；X-α-D-Galactoside X-α-D-半乳糖苷；
分子式：C14H15BrClNO6
4） 分子量：408.64g/mol
5） 純度：≥98%（TLC）
6） 外觀：白色或近白色結(jié)晶粉末
7） 化學(xué)結(jié)構(gòu)：
使用方法【懋康整理】
方法1：直接倒入固體培養(yǎng)基
溶解60mg X-α-gal于3ml DMF得20mg/ml儲存液，馬上使用或者避光儲存于-20℃，6個月穩(wěn)定；
將高壓滅菌好的瓊脂培養(yǎng)基于室溫冷卻至50℃；
按照每升培養(yǎng)基加入1ml 20mg/ml X-α-gal儲存液的用量，直接加入冷卻好的瓊脂培養(yǎng)基；【若有需要，此時也可加入篩選用的抗生素】；
倒平板，使用前必須讓培養(yǎng)基室溫凝固（通常至少需30min）。
方法2：涂布于預(yù)制培養(yǎng)平板上
溶解24mg X-α-gal于6ml DMF得4mg/ml儲存液，馬上使用或者避光儲存于-20℃，6個月穩(wěn)定；
超凈工作臺內(nèi)放置已經(jīng)倒好的固體培養(yǎng)基，使其表面干燥；
吸取200μl (15cm平板) 或100μl（10cm平板）4mg/ml X-α-gal 儲存液于預(yù)制培養(yǎng)平板上，并涂布使其均勻分散在表面【注意：平板邊緣通常很難得以充分涂布，可能導(dǎo)致假陽性克隆生成。建議條件可能下，于平板中央挑取克隆】。
使用前將上述涂布好的篩選平板于超凈工作臺內(nèi)，至少晾干30min；
將轉(zhuǎn)化好的細菌或酵母涂于平板上，分別置于37℃或30℃倒置培養(yǎng)，直至藍色菌落出現(xiàn)。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） | 貨期 |
MF2003-25MG | X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷 | 25mg | 285 | 現(xiàn)貨 |
MF2003-100MG | X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷 | 100mg | 800 | 現(xiàn)貨 |
MF2003-250MG | X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷 | 250mg | 1500 | 現(xiàn)貨 |
產(chǎn)品訂購【高純度進口原料，≥98%（TLC），現(xiàn)貨供應(yīng)，國內(nèi)各科研單位*】：
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】